对于肺炎支原体的检测主要依靠分离培养和血清学试验。分离培养是指采集可疑病人的痰或咽拭子进行接种，5～10天后观察有无能吸附多种动物红细胞和气管上皮细胞、HeLa细胞等的菌落，此类吸附可被特异性抗体所抑制。分离的支原体经形态、溶血和生化反应作初步鉴定后需进一步用特异性抗血清作生长抑制试验和代谢抑制试验。用病人血清和支原体脂质抗原作补体结合试验，恢复期较急性期效价高4倍以上即具有诊断价值。也可以采用间接免疫荧光试验、间接血凝ELISA检测标本。